紫外光度計箱體蓋子沒蓋緊會影響吸光度嗎
問題描述: 1.儀器是否工作正常(光源燈老化,電壓不穩定,集成電路板、顯示器有毛病,波長調節器有毛病等等) 2.標準溶液濃度是否準確 3.所用方法是否合理(你選用的標準方法是否符合你要測定的對象——被測定濃度范圍,干擾情況,賦存狀態等等) 4.所用試劑是否符合要求(純度、干擾情況) 5.所用量器(天平、容量瓶、移液管等)是否存在系統誤差 6.配置顯色過程是否誤操作(加入試劑順序、加入量等) 7.顯色時間、顯色溫度是否符合要求 8.樣品槽是否潔凈 9.測試吸光度范圍是否在0.2--0.8之間 除此之外,數據處理也會帶來誤差。最好采用標準系列法,平行多次測定,計算機程序繪圖,計算機計算每側測定結果并求出平均值,按誤差理論對數據進行處理,最后給出結果。
回答(1). 紫外的吸收值A與濃度C之間關系是A=ECL,朗伯-比爾定律,在A=0.2--0.8之間時,吸收度與濃度c呈線性正比關系,A太大或太小兩者關系直線會變成曲線,不成正比。 因為比色皿都是放一起的,每次用的都不是同樣的,應該都挺干凈的。 國標是測700nm波長下的吸光度,來算磷的濃度的。 先用相同溶劑測測兩個比色杯的吸收度是否一樣,扣除空白是用溶劑(例如,測樣用的是水做溶劑,則用水做空白)。
回答(2).波長調了嗎,至于測得吸光度,減去空白對照的話不會比實際值有太大出入
回答(3).250-300 nm 有中等強度的吸收峰(ε=200-2000),芳環的特征 吸收(具有精細解構的B帶)。
回答(4).1.調整(1) 在接通電源前,應對儀器的安全性進行檢查,電源線接線應牢固,接地線通地要良好,各個調節旋鈕的起始位置應該正確,然后再接通電源。 (2) 將靈敏度旋鈕調至“1”檔(放大倍率最小)。調波長調節器至所需波長。 (3) 開啟電源開關,指示燈亮,選擇開關置于“T”,調節透光率[100?旋鈕使數字顯示[100.0]左右,預熱20min . 根據溶液濃度大小,選擇液層厚度合適的吸收池。 2.校正(!)打開吸收池暗室蓋(光門自動關閉),調節[0?]旋鈕,使數字顯示為“00.0”,蓋上吸收池蓋,將參比溶液置于光路,使光電管受光,調節透光率[100?] 旋鈕,使數學顯示為“100.0”。 (2)如果顯示不到“100”,則可適當增加電流放大器靈敏度檔數,但應盡可能使用低檔數,這樣儀器將有更高的穩定性。當改變靈敏度 后必須重新校正“0”和“100”。 (3)按(1)連續幾次調整“00.0”和“100.0”后,如將選擇開關置于“A”,調節吸光度調零旋鈕,使數字顯示為“.000”,即可進行下面吸光度A的測量;如將選擇開關置于“C”,將標準溶液推入光路,調節濃度旋鈕,使得數字顯示值為已知標準溶液濃度數值,即可進行下面濃度c的測量。 3.測定(1) 吸光度A的測量。將要測A的試樣溶液推入光路,顯示值即為待測樣品的吸光度值A。 (2) 濃度c的測量。將要測c試樣溶液推入光路,即可讀出待測樣品的濃度值c。 4.結束測量完畢,關閉電源,將各調節旋鈕恢復至初始位置。取出吸收池洗凈,晾干,存于專用盒內。 注意事項:(1) 使用前,使用者應該首先了解本儀器的結構和原理,以及各個旋鈕之功能。 (2) 儀器接地要良好,否則顯示數字不穩定。 (3) 如果大幅度改變測試波長時,在調整“00.0”和“100”后稍等片刻(因光能量變化急劇,光電管受光后響應緩慢,需一段光響應平衡時間),當穩定后,重新調整“00.0”和“100”即可工作。 (4) 儀器左側下角有一只干燥劑筒,應保持其干燥,發現干燥劑變色應立即更新或烘干后再用。 (5) 當儀器停止工作時,關掉電源,電源開關需同時切斷,并罩好儀器 希望以上對你有所幫助。
回答(5).剛好個人前段時間也思考了一下這個方面,所以回復下個人理解。這里說紫外吸光度: A=-lgT 其中A是吸光度,T是透過率,即入射光透過樣品后的光強(透過光強)與透過前入射光強的比值。 入射光照射在待測樣品上,會有反射、散射、透射以及吸收。因此,入射光強=反射光強+散射光強+透射光強+吸收光強??紤]一般的溶液樣品,散射和反射可以忽略不計或者經參比樣品扣除,因此入射光強可近似等于透射光強+吸收光強。 對于紫外吸收光譜而言,是由價電子受激躍遷而形成的。因此,當待測樣品確定的時候(組成及物質的量確定),測量設備及儀器不發生變動的情況下(主要指吸收光程、測量時間等),吸收光強理論上是恒定的。 正常情況入射光能量足夠,即入射光強比吸收光強要強,即在吸收光程內物質的紫外吸收達到了飽和。另一方面,對于特定的價電子躍遷而言,是否發生躍遷只和激發光的頻率(即能量)有關,而與光的強弱無關。 因此,如果光源的強度,即入射光強發生變化(正常情況下仍比樣品吸收光強要強),吸收光強理論上應該不變,使得透射光強會發生變化。 放在透過率計算上來看,就是相當于分子分母同時加上某一個不為零的數值。而由于分子分母不相等,所以勢必造成透過率的變化,從而造成吸光度的變化。這里可以說,吸光度和光源強度有關系。 第二,光源在不同波長處的光的強弱是不同的,并且對于待測樣品而言,對于不同波長處的光的吸收能力不同。將所有波長連一起,就是某一波段的吸收光譜。因此,光源強度發生變化會導致吸收光譜所有波長處的吸光度都發生變化。 但是,當光源強度發生變化時,往往不同波長處的變化幅度是不一樣的。比如,以兩個不同的光源為例,可能因為氘燈不一樣、濾光片對不同波長的透過率不一樣(也可以說沒有完全相同的濾光片)等等,兩個光源的光強在波長a處相差了30?而在波長b處就相差了50? 因此,光源強度發生變化不僅會導致各個波長處的吸光度發生變化,而且往往變化幅度不一致,即導致吸收光譜的形狀發生變化。
回答(6).標準方法用的50mL比色管,現在手邊只有25mL的,可以用25mL代替。所加待測液、各種試劑直接減半。標曲若用100mL的,那就是增加一倍。這樣操作對結果沒有影響。還有就是標曲用100mL的、待測液用25mL的,不是同規格比色管,對結果沒有影響,因為紫外可見分光光度計的比色池用一套,厚度都是一樣的,除非放在不一樣的比色管用眼睛直接看才有影響,這樣的話只能再倒在一樣大的比色管里,總之只要濃度一樣就可以了。 比色法 供試品本身在紫外-可見光區沒有強吸收,或在紫外光區雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度,加入適當的顯色劑,使反應產物的最大吸收移至可見光區。 用比色法測定時,由于顯色時影響顯色深淺的因素較多,應取供試品與對照品或標準品同時操作。除另有規定外,比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液,然后依次加入等量的相應試劑,并用同樣方法處理。 當吸光度和濃度關系不呈良好線性時,應取數份梯度量對照品溶液,用溶劑補充至同一體積,顯色后測定各份溶液的吸光度,然后以吸光度與相應的濃度繪制標準曲線,再根據供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應的濃度,并求出其含量。 5 注意事項 5.1 試驗中所用的量瓶和移液管均應經檢定校正、洗凈后使用。 5.2 使用的石英吸收池必須潔凈。當吸收池中裝入同一溶劑,在規定波長測定各吸收池的透光率,如透光率相差在0.3?下者可配對使用,否則必須加以校正。 5.3 取吸收池時,手指拿毛玻璃面的兩側。裝樣品溶液以池體積的4/5為度,使用揮發性溶液時應加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應無殘留溶劑,為防止溶劑揮發后溶質殘留在池子的透光面,可先用醮有空白溶劑的擦鏡紙擦拭,然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放入樣品室時應注意每次放入方向相同。使用后用溶劑及水沖洗干凈,晾干防塵保存,吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發煙硝酸(3:1V/V)混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時,吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡,否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會損壞吸收池的光學表面,并應充分用水沖洗,以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。 5.4 含有雜原子的有機溶劑,通常均具有很強的末端吸收。因此,當作溶劑使用時,它們的使用范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外,當溶劑不純時,也可能增加干擾吸收。因此,在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求,即將溶劑置lcm石英吸收池中,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質)測定其吸光度,溶劑和吸收池的吸光度應符合表3規定。 表3 以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規定 波長范圍(nm) 220-240 241-250 251-300 300以上 吸光度 ≤ 0.40 ≤ 0.20 ≤ 0.10 ≤ 0.05 每次測定時應采用同一廠牌批號,混合均勻的同批溶劑。 5.5 稱量應按藥典規定要求。配制測定溶液時稀釋轉移次數應盡可能少,轉移稀釋時所取容積一般應不少于5ml。含量測定時供試品應稱取2份,如為對照品比較法,對照品一般也應稱取2份......
回答(7).有兩種可能接近4: 1、那人用的儀器靈敏度很高,但也不應該報這樣的測定結果。 2、那人測定時把溶液稀釋了,然后的數據是吸光度×稀釋倍數。
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